Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现口内自身特异性到经常出现1M-高血压临床学术研究腹泻的十分困难数万人在儿童时期就有很好的描绘出，多个口内自身特异性白血病的儿童之前有70%在肝细胞类比后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一%-增大到84%。比起之下，占临床学术研究1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的得病前提还从未想得到非常进一步的学术研究。

越来越多的人开始适用分期系统对来假设1M-高血压的十分困难：有机体在经常出现多种口内自身特异性时带入第1之前，经常出现血糖异常时带入第2之前，经常出现腹泻时带入第3之前。一些多发口内自身特异性白血病的有机体，在1期和2期，十分困难非常快，并演进为得病的1M-高血压。我们之前描绘出了一分组在首次侦测到多种口内自身特异性样本后至极少10年无高血压的短一段时间十分困难者，这分组病症人数极少，但特点非常明确。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T肽反不应在十分困难很迟的病症之前原则上不长期存在，但在近期得病和长期长期存在的高血压病症之前很难以侦测到。这意味著证明，与十分困难病症比起，这些病症胃溃疡反不应的缓冲增强。

早期学术研究证明，尽管缓冲性T肽(Treg)数量情况下，但高血压病症长期存在一些新功能局限性，其之前有数对IL-2的反不应能力增高。此外，高血压病症之前的效不应CD4+T肽意味著对缓冲非常具抵抗性，展现出为效不应T肽的减缓逼近，自然造成了的Treg和体外造成了的减缓Treg，以及抗原经历的CD4+T肽之前IL-2反不应逼近。本学术研究的目的是描绘出了CD4+缓冲性T肽(Treg)在一个大极很迟十分困难者之前的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为了将的平行学术研究，在21岁所列确诊的病症家庭成员之前检查1M-高血压的致命因素所。我们之前描绘出了长期很迟十分困难者的特点，他们保持一致多重口内自身特异性白血病少于10年，但从未经常出现高血压的临床学术研究腹泻，迟性或非顺利外阴胃溃疡。随后，10名一直保持一致无高血压并愿意共享大量血液样本的很迟十分困难者纳入T和B肽新功能学术研究。在目前为止的学术研究之前，8名迟十分困难者(SP分组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身特异性白血病。所有的参与者都属于1M-高血压十分困难的1期，尽管一些人随后失去了口内自身特异性对某些抗原的白血病反不应，然而，一名病症并未属于2期至极少6年，但从未经常出现临床学术研究腹泻，一名病症被诊断为高血压，该患者72岁，在采集试验中样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在建模之前对该丝氨酸顺利进行了另行风险评估。分离外周血单个核肽(PBMCs)，选用多参数流式肽法术和T肽减缓试制风险评估丝氨酸之前Treg的频谱、遗传基因和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)顺利进行无统筹聚类学术研究，风险评估Treg遗传基因。

结果：与肥胖症丝氨酸比起，来自迟十分困难体的清醒CD4+T肽的统筹聚类推测，应答的清醒CD4+ Treg频谱增大，与糖皮质激素减缓的TNFR之外肽(GITR)传达增大有关。一名HbA1c消退的病症与十分困难很迟者和比如说的试验中分组比起，Treg谱各有不尽相同。新功能学术研究证明，与肥胖症丝氨酸比起，来自很迟十分困难体的Treg内皮细胞的CD4+效不应T肽减缓引人注意受损。展现出为对效不应CD4+T肽CD25和CD134传达的减缓增大。

三幅1 深入的遗传基因学术研究推测，CD4+Treg亚M-在迟十分困难队列之前增大。由FlowSOM作用于的Treg室，围住在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肽上。根据标明物传达鉴定出10个元簇:清醒T肽_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肽;HLA-DR + GITR +清醒T肽;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)适用9个不尽相同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个结点代表人一个战略性(100个战略性)，相当大的元战略性(10个元战略性)在结点分组周围上色。每个结点之前的点心三幅声称单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整体标明传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖物。(e-l)相比较总质量为每个metacluster装中央线三幅(总质量> 0.05%)确切为HD和SP分组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肽(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肽(l)。黄色红色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 适用CITRUS的预测模M-声称，Treg频谱的增大是十分困难很迟的字样。这两项依赖型(a - f)和葡萄学术研究(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T肽上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分离，三维FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)分组以及丝氨酸SP 606(黄色)之前CD25+ cd127的频谱统计三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的装中央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达风速渐变，圆圈突出的簇被标识为SP和HD队列两者之间的不尽相同。(j)装中央线三幅推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)分组之前，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比较总质量(%-)。(k)直方三幅推测每个簇的遗传基因(粉红色)和Treg标明相比较传达与时代背景传达(浅蓝色);上列，线程Treg_3;下面四人，线程Treg_4。时代背景与所有其他簇之前标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者比起，十分困难很迟者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T肽元簇(清醒T肽_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肽;HLA-DR + GITR +清醒T肽;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方三幅(c)和统计三幅(d)。Wilcoxon一组符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸有数，p< 0.05(浅蓝色)丝氨酸SP 606和比如说的HD不有数在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR传达，从这两项依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(黄色)串联，推测直方三幅(e)和统计三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检验

三幅4 来自很迟十分困难的CD4+ treg肽控制效不应CD4+T肽的能力增高。SP分组用浅蓝色的中央线和红色声称，HD分组用黄色的中央线和红色声称，黄色的中央线/红色声称丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肽顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠还原肽，人才培养3天后顺利进行流式肽法术侦测。(a-d)与CD4+；也者相比较不应的treg人才培养(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。适用白血病对照(应答的响不应肽不含treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差学术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效不应CD4+T肽对很迟十分困难的T肽还原的减缓非常脆弱。SP分组用浅蓝色的中央线和红色声称，HD分组用黄色的中央线和红色声称，黄色的中央线/红色声称丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肽顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠还原肽，人才培养3天后顺利进行流式肽法术(CD25反染)和肽因子学术研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分数万人(b)。(c,d) CD25减缓百分数万人(c)和CD134减缓百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一之前的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差学术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

断定结论：我们断定的断定结论是，来自很迟十分困难子的还原清醒CD4+Treg在GITR传达之前想得到了扩展和多样，特别强调了进一步学术研究Treg在1M-高血压风险有机体之前的异质性的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28