Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内神经性到消失1改型肝炎病理病因的方面率在老年人以前就有不太好的刻画，多个口内神经性白血病的老年人里有70%在血清转换后10周内患有肝炎，而随访15年的老年人这一数量减低到84%。相对之下，占病理1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发病机制还不会赢取充分的统计学。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1改型肝炎的方面：生物锥体在消失多种口内神经性时踏入第1阶段，消失血糖异常时踏入第2阶段，消失病因时踏入第3阶段。一些多发口内神经性白血病的生物锥体，在1期和2期，方面较快，并发展为发病的1改型肝炎。我们早先刻画了一第一组在首次侦测到多种口内神经性样本后至少10年无肝炎的短时间方面者，这第一组病患者人数少，但特性更加明确。随后，我们发现口内自身肝细胞特异性CD8+T细胞会反理应在方面较快的病患者里基本不不存在，但在近期发病和长期不存在的肝炎病患者里很较难侦测到。这似乎表明，与方面病患者相对，这些病患者神经性反理应的调节增强。

早期数据于数，尽管调节性T细胞会(Treg)数量长时间，但肝炎病患者不存在一些功能缺陷，其里除此以外对IL-2的反理应能力减低。此外，肝炎病患者里的效理应CD4+T细胞会似乎对调节凸显抵抗性，展现为效理应T细胞会的正向减弱，自然产生的Treg和锥体外产生的正向Treg，以及肝细胞个人经历的CD4+T细胞会里IL-2反理应减弱。本统计学的目的是刻画了CD4+调节性T细胞会(Treg)在群集极较快方面者里的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX统计学是一项以人群为基础的纵向统计学，在21岁以下确诊的病患者亲属里检验1改型肝炎的脆弱因素。我们早先刻画了长期较快方面者的特性，他们保持多重口内神经性白血病超过10年，但不会消失肝炎的病理病因，慢性或非进行时性神经性。随后，10名之前保持无肝炎并愿意提供大量血清样本的较快方面者纳入T和B细胞会功能分析。在目前的统计学里，8名慢方面者(SP第一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的口内神经性白血病。所有的发起者都西北面1改型肝炎方面的1期，尽管一些人随后失去了口内神经性对某些肝细胞的白血病反理应，然而，一名病患者已经西北面2期至少6年，但不会消失病理病因，一名病患者被病患为肝炎，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计学里对该小分子进行时了单独评量。分离外周血单个核分裂细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会心法和T细胞会正向试验评量小分子里Treg的频率、表改型和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类核分裂查、表征和回归)进行时无监理聚类分析，评量Treg表改型。

结果：与身心健康小分子相对，来自慢方面锥体的知觉CD4+T细胞会的监理聚类辨识，启动时的知觉CD4+ Treg频率减低，与糖皮质激素正向的TNFR相关细胞内(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的病患者与方面较快者和给定的印证第一组相对，Treg谱有所相异。功能于数，与身心健康小分子相对，来自较快方面锥体的Treg介导的CD4+效理应T细胞会正向明显受到破坏。展现为对效理应CD4+T细胞会CD25和CD134传达的正向减低。

绘出1 深入的表改型分析辨识，CD4+Treg亚改型在慢方面路由表里减低。由FlowSOM分解的Treg三楼，有数在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据记号物传达核分裂查出10个元簇:知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个相异Treg记号分解的10个元簇的MST。每个节点都有一个坦克部队(100个坦克部队)，更多的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点第一组周围上色。每个节点里的糕绘出透露单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整锥体记号传达。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对轻元素为每个metacluster箱直通绘出(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞会(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞会(l)。粉红色橘色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核分裂查。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 采用CITRUS的预测证实，Treg频率的减低是方面较快的标志。分级介导(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和给定的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞会上的区别。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的都有性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时分离，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及小分子SP 606(粉红色)里CD25+ cd127的频率概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导同构的箱直通绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表间的相异。(j)箱直通绘出辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对轻元素(数量)。(k)直方绘出辨识每个簇的表改型(粉红色)和Treg记号相对传达与背景传达(粉红色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇里记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核分裂查

绘出3 与身心健康献血者相对，方面较快者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T细胞会元簇(知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热绘出(sp606不除此以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(黄褐色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR传达串联，辨识直方绘出(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和核分裂查，p< 0.07(粉红色)所有小分子除此以外，p< 0.05(粉红色)小分子SP 606和给定的HD不除此以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级介导，从所有HD(黄褐色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，辨识直方绘出(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核分裂查

绘出4 来自较快方面的CD4+ treg细胞会控制效理应CD4+T细胞会的能力减低。SP第一组用粉红色的直通和橘色透露，HD第一组用金色的直通和橘色透露，粉红色的直通/橘色透露小分子sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(理反之亦然者)被记号为CFSE, Treg按检视的数量校准。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，人才培养3同一天进行时流式细胞会心法侦测。(a-d)与CD4+理反之亦然者相对理应的treg人才培养(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE正向%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向%-。采用白血病印证(启动时的第一组织起来细胞会包含treg)近似值正向%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 效理应CD4+T细胞会对较快方面的T细胞会活化的正向更敏感。SP第一组用粉红色的直通和橘色透露，HD第一组用金色的直通和橘色透露，粉红色的直通/橘色透露小分子sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(理反之亦然者)被cfsel记号，treg按检视的数量校准。用抗CD3 /28微珠活化细胞会，人才培养3同一天进行时流式细胞会心法(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606理反之亦然者联合人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE正向百分率(b)。(c,d) CD25正向百分率(c)和CD134正向百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自较快方面子的活化知觉CD4+Treg在GITR传达里赢取了扩展和比较丰富，强调了进一步统计学Treg在1改型肝炎风险生物锥体里的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28