Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身蛋白质到浮现1型号冠心病针灸患者的成效不下在孩童时期就有很好的描述，多个胰脏自身蛋白质无患者的孩童中会有70%在胰岛素转换后10短期内患上冠心病，而随访15年的孩童这一比例减不算到84%。相对于之下，占针灸1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的发病机制还没有人获得充分的研究成果。

愈发多的人开始用于依此子系统来界定1型号冠心病的成效：生殖在浮现多种胰脏自身蛋白质时进入第1阶段性，浮现食欲异常时进入第2阶段性，浮现患者时进入第3阶段性。一些多发胰脏自身蛋白质无患者的生殖，在1期和2期，成效较更慢，并转型为发病的1型号冠心病。我们以前描述了一四组在首次侦测到多种胰脏自身蛋白质样本后最不算10年无冠心病的极更慢成效者，这四组高血压人数不算，但基本特征更加明确。随后，我们断定胰脏自身蛋白质特异性CD8+T蛋白反应在成效快速的高血压中会基本不假定，但在近期发病和长期假定的冠心病高血压中会很不易侦测到。这有可能证明，与成效高血压相对于，这些高血压自身病原体的调节弱化。

早期研究成果证明，尽管调节性T蛋白(Treg)数量也就是说，但冠心病高血压假定一些基本功能缺陷，其中会包括对IL-2的反应能力减缓。此外，冠心病高血压中会的畸变CD4+T蛋白有可能对调节更具抵抗性，表现为畸变T蛋白的消除减弱，自然产生的Treg和粘液产生的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T蛋白中会IL-2反应减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在群集极快速成效者中会的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究成果是一项以群微为基础的中轴研究成果，在21岁所列胃癌的高血压亲属中会定期检查1型号冠心病的凶险因素。我们以前描述了长期快速成效者的基本特征，他们维持多重胰脏自身蛋白质无患者超过10年，但没有人浮现冠心病的针灸患者，更慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续维持无冠心病并愿意共享大量血液样本的快速成效者扩展到T和B蛋白基本功能深入研究。在目前为止的研究成果中会，8名更慢成效者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身蛋白质无患者。所有的行动者都处于1型号冠心病成效的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身蛋白质对某些蛋白质的无患者反应，然而，一名高血压已经处于2期最不算6年，但没有人浮现针灸患者，一名高血压被诊断为冠心病，该受试者72岁，在挖掘出科学研究样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中会对该ADP来进行了单独审核。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白练成和T蛋白消除试验审核ADP中会Treg的频不下、表型号和基本功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)来进行无委派聚类深入研究，审核Treg表型号。

结果：与肥胖症ADP相对于，来自更慢成效微的梦境CD4+T蛋白的委派聚类揭示，激来生的梦境CD4+ Treg频不下减不算，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减不算有关。一名HbA1c上升的高血压与成效快速者和转换的对照四组相对于，Treg序有所有所不同。基本功能深入研究证明，与肥胖症ADP相对于，来自快速成效微的Treg特异性的CD4+畸变T蛋白消除引人注意毁损。表现为对畸变CD4+T蛋白CD25和CD134表述的消除减不算。

示意图1 深入的表型号深入研究揭示，CD4+Treg变异号在更慢成效数据流中会减不算。由FlowSOM分解的Treg会议室，群聚在来自所有ADP的来生CD4+CD45RA -蛋白上。根据标识物表述检验出10个元簇:梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;两条路线程Treg_1;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;和两条路线程Treg_4。(a)用于9个有所不同Treg标识分解的10个元簇的MST。每个键值都有一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在键值四组周围上色。每个键值中会的饼示意图透露单个标识的表述高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示整微标识表述。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster筒两条路线示意图(丰度> 0.05%)已确定为HD和SP四组:两条路线程Treg_2 (e),两条路线程Treg_3 (f),两条路线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白(l)。紫色圆点都有慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模型号证实，Treg频不下的减不算是成效快速的徽章。评定门控(a - f)和橄榄深入研究(g-k)相当SP行动者和转换的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的都有性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，各种类型FlowSOM群微。(b) HD(黑斑)和SP(白点)四组以及ADPSP 606(紫色)中会CD25+ cd127的频不下简介示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控姪集的筒两条路线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(两条路线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(两条路线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(两条路线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+两条路线程T cell)。(g - i)橄榄簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述数值着色，圆点突出的簇被识别为SP和HD数据流之间的有所不同。(j)筒两条路线示意图揭示了在SP(白点)和HD(灰点)四组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于丰度(比例)。(k)示意图表揭示每个簇的表型号(粉红色)和Treg标识相对于表述与着重表述(黄色);上列，两条路线程Treg_3;示例一行，两条路线程Treg_4。着重与所有其他簇中会标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图3 与肥胖症献血者相对于，成效快速者梦境treg的GITR减不算。每个梦境CD4+T蛋白元簇(梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表述标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表述热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述串联，揭示示意图表(c)和简介示意图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(紫色)所有ADP包括，p< 0.05(黄色)ADPSP 606和转换的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从评定门控，从所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，揭示示意图表(e)和简介示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图4 来自快速成效的CD4+ treg蛋白控制畸变CD4+T蛋白的能力减缓。SP四组用黄色的两条路线和圆点透露，HD四组用紫色的两条路线和圆点透露，紫色的两条路线/圆点透露ADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按注意到的比例校准。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白，养成3天后来进行流式蛋白练成侦测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg养成(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。用于无患者对照(激来生的响应蛋白不含treg)计算消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

示意图5 畸变CD4+T蛋白对快速成效的T蛋白来生化的消除更敏感性。SP四组用黄色的两条路线和圆点透露，HD四组用紫色的两条路线和圆点透露，紫色的两条路线/圆点透露ADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按注意到的比例校准。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白，养成3天后来进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因姪深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

正确性：我们得出的正确性是，来自快速成效姪的来生化梦境CD4+Treg在GITR表述中会获得了扩展和丰富，阐释了进一步研究成果Treg在1型号冠心病几率生殖中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28